Low Endotoxin Recovery (niedrige Endotoxin-Wiederfindung): Bewertung des technischen Berichts Nr. 82 der PDA und Demaskierung von Endotoxin mit spezieller Probenbehandlung

Christian ist derzeit als Projektkoordinator für LER-Projekte tätig und hat an der Universität Regensburg in Chemie promoviert. Bevor er zu bioMérieux kam, arbeitete Christian im Qualitätsmanagement.

Über das als Low Endotoxin Recovery (LER, niedrige Endotoxin-Wiederfindung) bezeichnete Phänomen wurde erstmals von Chen und Vinther im Jahr 2013 berichtet. Es wurde in Biologika und bestimmten therapeutischen Proteinen umfassend untersucht und identifiziert.

LER ist ein temperatur- und zeitabhängiger Prozess und wird als Verlust an nachweisbarer Endotoxin-Aktivität im Laufe der Zeit bei Verwendung von Faktor-C-basierten Assays (LAL und rFC) definiert, wenn unverdünnte Produkte mit bekannten Mengen an Endotoxinstandards eingebracht werden.

Zulassungsbehörden verlangen auch Haltezeitstudien, um die Gültigkeit der Testmethoden für die Endotoxin-Freisetzung während der Überprüfung von Zulassungsgesuchen für Biotech-Produkte zu bestimmen, sowie neue Methoden, um das Problem zu beseitigen.

Im März 2019 veröffentlichte die Parenteral Drug Association (PDA) TR82 über LER. Der Bericht stellt eine dringend benötigte Informationsquelle und Anleitung dar, einschließlich wissenschaftlicher Erkenntnisse zum Mechanismus, Daten zur klinischen Relevanz sowie empfohlene Verfahren zur Analyse und Minderung der Endotoxin-Maskierung, die häufig zu LER in Biologika führt.

Dieses umfassende Dokument ist das Ergebnis von drei Jahren intensiver Arbeit der PDA LER Task Force, die sich aus Mitgliedern der US-amerikanischen FDA, der akademischen Welt, der Pharmabranche und allen Anbietern von Endotoxin-Tests zusammensetzt.

Um TR82 in vollem Umfang zu lesen, ist er für Mitglieder verfügbar und kann direkt über das Technical Reports Portal der PDA erworben werden.

TR82 ist ein wichtiges wissenschaftliches Dokument und ein Leitfaden, der es Pharmaunternehmen ermöglichen wird, das Phänomen der LER erfolgreich zu mindern, mit dem letztendlichen Ergebnis einer verbesserten Prozess- und Produktkenntnis.

Wichtige Kernpunkte des Berichts sind:

1. Eine Beschreibung der zugrunde liegenden Mechanismen und beitragenden Faktoren von LER,
2. Eine Zusammenfassung der potenziellen klinischen Auswirkung,
3. Klare Richtlinien zur Durchführung von LER-Haltezeitstudien,
4. Und der Industrie wird eine Auswahl an Strategien zur Minderung von LER zur Verfügung gestellt.

Ein wichtiger Teil von TR82 ist der umfangreiche Anhang mit Fallstudien zu LER-Vorkommen, der sowohl Analysen der Ursachen und Endotoxin-Präparate als auch Methoden zur Beseitigung von LER umfasst.

In einer der Studien, Fallstudie 7: Bewertung eines Endotoxin-Demaskierungsprotokolls, wurde die Anwendung der ENDO-RS-Methode, die von Hyglos - einem Unternehmen von bioMérieux - entwickelt wurde, bewertet. In dieser Studie wurde eine Probe, von der bekannt war, dass sie von LER betroffen ist, verwendet, um ein Probenvorbereitungs-Protokoll mit ENDO-RS-Reagenzien vor dem Nachweis von Endotoxin mit der LAL-Methode zu bewerten. Die Ergebnisse zeigten, dass das ENDO-RS-Protokoll das Endotoxin unter allen getesteten Bedingungen zuverlässig nachweisen konnte, was eine zuverlässige Wiederherstellung sicherstellte und das Risiko falsch-negativer Testergebnisse reduzierte.

Die ENDO-RS-Methode ist ein patentierter Satz von Reagenzien zur Probenvorbereitung, der die Maskierung von Endotoxin in biopharmazeutischen Formulierungen, die in der Regel Tenside, Chelatbildner oder bestimmte pharmazeutische Wirkstoffe (API) enthalten, angeht. ENDO-RS ermöglicht unabhängig von der Lagerungszeit und der Endotoxin-Konzentration eine vollständige quantitative Rückgewinnung von Endotoxin vor dem Nachweis. bioMérieux bietet spezialisierte Services zur Entwicklung von Protokollen unter Verwendung von ENDO-RS an. Unsere Arbeit für führende Pharmaunternehmen hat zu validierten Methoden für LER geführt, die die behördlichen Anforderungen erfüllen.