DIE JAGD NACH DEM FEHLENDEN ENDOTOXIN: Ist Auslagerung die Lösung für Low Endotoxin Recovery LER, (niedrige Endotoxin-Wiederfindung)?
In diesem Whitepaper werden die Ursachen, die zu einer niedrigen Endotoxin-Wiederfindung (LER) beitragen, die damit verbundenen Auswirkungen sowie Lösungen zur Behebung der daraus resultierenden Probleme beschrieben. Wir besprechen auch die Vor- und Nachteile der internen Entwicklung Ihrer Demaskierungsprotokolle und wie Sie mit dem ENDO-RS® Demaskierungs-Toolkit den Prozess von Anfang bis Ende vereinfachen können.
Anschließend skizzieren wir die Vor- und Nachteile der Auslagerung Ihres Demaskierungsprojekts, worauf Sie bei einem Drittunternehmen achten sollten und warum Sie bioMérieux bei der Entwicklung Ihres Demaskierungsprotokolls vertrauen können und sollten.
Einführung
Zweifelsohne entwickeln sich Arzneimittel. Denken Sie zum Beispiel daran, dass früher kleine Moleküle die Pharmabranche dominierten, heute aber immer mehr Biologika wie Antikörper und Proteine auf dem Markt sind. Tatsächlich gibt es bis heute über 400 von der FDA zugelassene rekombinante Therapien, die zeigen, wie Biologika Vorteile wie erhöhte Wirksamkeit und Spezifizität bieten und gleichzeitig die Toxizität und das Risiko unerwünschter Nebenwirkungen reduzieren1,2.
Leider stellen die Prozesse zur Herstellung stabiler biologischer Formulierungen oft ein besonderes Problem dar, nämlich das des Endotoxin-Nachweises. Endotoxine sind Lipopolysaccharidmoleküle (LPS) aus gramnegativen Bakterienzellwänden, die bei Patienten schwere Immunreaktionen hervorrufen können, die zu Sepsis und sogar zum Tod führen können3.
Der Endotoxin-Nachweis ist ein integraler Bestandteil der Qualitätskontrolle von Arzneimitteln, und alle sterilen pharmazeutischen und medizintechnischen Produkte, die mit dem Blut eines Patienten oder mit pharmazeutischen oder okulären Flüssigkeiten in Berührung kommen, müssen vor ihrer Freigabe auf Endotoxine getestet werden. In einigen Fällen kann jedoch das Vorhandensein von maskierten Endotoxinen weit verbreitete Endotoxin-Testmethoden unzuverlässig - ein Phänomen, das als „Low Endotoxin Recovery“ (LER, niedrige Endotoxin-Wiederfindung) bekannt ist3.
Wir sprachen mit unserem Experten, Dr. Christian Faderl, um mehr über maskierte Endotoxine zu erfahren und wie Pharmahersteller das Problem der LER wirksam angehen können.
„LER ist ein hohes Sicherheitsrisiko für Patienten, sagt Dr. Faderl: Wenn ein Produkt ein Problem mit LER aufweist, ist das Endotoxin versteckt , darum können Sie die Kontamination bei der Qualitätskontrolle nicht nachweisen. Maskierte Endotoxine können aber immer noch eine Immunreaktion auslösen.“
MASKIERTE ENDOTOXINE: VERSTECKTE GEFAHREN KENNEN
Es gibt derzeit mehrere Methoden, die einen Test auf bakterielle Endotoxine ermöglichen: Limulus-Amöbozyten-Lysat (LAL), Tachypleus-Amöbozyten-Lysat (TAL) und rekombinanter Faktor C (rFC).
Alle diese Methoden beruhen jedoch auf einem als Faktor C bekannten Protein, das sich mit LPS-Molekülen verbindet und eine Reaktion oder Kaskade von Reaktionen in Gang setzt, die es ermöglichen, Endotoxine nachzuweisen und zu messen. Bezeichnenderweise wird Faktor C durch LPS nur in seiner natürlichen aggregierten Form aktiviert.3,4
Herstellungsprozesse für Biologika- und Endproduktformulierungen erfordern häufig Polysorbat-Tenside, um um Proteinaggregation zu verhindern, und chelatbildende biologische Puffer, um einen optimalen pH-Wert aufrechtzuerhalten. Diese Wirkstoffe sind wichtig, um die Stabilität der Biologika sicherzustellen und ihre Struktur und Funkion aufrechtzuerhalten. Sie können aber auch die Aggregatstruktur von LPS aufbrechen, das sich in einer Lösung vollständig in Monomere auflösen kann. Diese aufgelösten Monomere können den Faktor C nicht mehr aktivieren und bleiben daher von Endotoxin-Tests unerkannt, was zu falsch-negativen Ergebnissen führt.4-6
Dr. Joseph Chen berichtete erstmals auf der PDA- Jahrestagung 2013 über LER. Dr. Chen zeigte, dass die Zugabe von geringen Mengen Endotoxin zu unverdünnten Biologika mit den zugelassenen Endotoxin-Testmethoden nicht nachgewiesen werden kann. Seitdem haben mehrere weitere Studien die Auswirkungen von Endotoxin-Maskierung und LER gezeigt.7-10
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